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我們來了解下ATCC細胞的活化方式吧

原載自:m.niangtai.cn[行情動態(tài)]  2019-04-03  瀏覽次數(shù):1397

   我們來了解下ATCC細胞的活化方式吧
  ATCC細胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后,已基本上飽和,為使細胞能繼續(xù)生長,同時也將細胞數(shù)量擴大,就必須進行傳代(再培養(yǎng))。
  傳代培養(yǎng)也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養(yǎng)細胞進行各種實驗的必經(jīng)過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以,而貼壁細胞需經(jīng)消化后才能分瓶。
  ATCC細胞的細胞活化方式:
  1.冷凍細胞之活化原則為快速解凍,以避免冰晶重新結(jié)晶而對細胞造成傷害,導(dǎo)致細胞之死亡。
  2.細胞活化后,約需數(shù)日,或繼代一至二代,其細胞生長或特性表現(xiàn)才會恢復(fù)正常(例如產(chǎn)生單株抗體或是其它蛋白質(zhì))。
  3.材料:37℃恒溫水槽、新鮮培養(yǎng)基、無菌吸管/離心管/培養(yǎng)瓶、液氮或干冰容器。
  ATCC細胞的解凍:
  (1)操作人員應(yīng)戴防護面罩及手套,防止冷凍管可能爆裂之傷害。
  (2)自液氮或干冰容器中取出冷凍管,檢查蓋子是否旋緊,由于熱脹冷縮過程,此時蓋子易松掉。
  (3)將新鮮培養(yǎng)基置于37℃水槽中回溫,回溫后噴以70%酒精并擦拭之,移入無菌操作臺內(nèi)。
  (4)取出冷凍管,立即放入37℃水槽中快速解凍,輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化,以70%酒精擦拭保存管外部,移入無菌操作臺內(nèi)。
  (5)取出解凍之細胞懸浮液,緩緩加入有培養(yǎng)基之培養(yǎng)容器內(nèi)(稀釋比例為1:10-1:15),混合均勻,放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。取0.1ml解凍細胞懸浮液作存活測試。
  (6)解凍后是否立即去除冷凍保護劑,依細胞種類而異,一般而言,大都不需要立即去除冷凍保護劑。倘若要立即去除,則將解凍之細胞懸浮液加入含有5-10ml培養(yǎng)基之離心管內(nèi),離心1000rpm,5分鐘,移去上清液,加入新鮮培養(yǎng)基,混合均勻,放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
  (7)若不需立即去除冷凍保存劑,則在解凍培養(yǎng)后隔日更換培養(yǎng)基。

 

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