ATCC細(xì)胞復(fù)蘇的原則：

　　在實際操作中，凍存細(xì)胞要進(jìn)行復(fù)蘇，再培養(yǎng)傳代。復(fù)蘇細(xì)胞一般采用快速融化法。以保證細(xì)胞外結(jié)晶快速融化，以避免慢速融化水分滲入細(xì)胞內(nèi)，再次形成胞內(nèi)結(jié)晶損傷細(xì)胞。

　　ATCC細(xì)胞的復(fù)蘇事項：

　　1.仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例，配置相應(yīng)的*培養(yǎng)基，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件與說明書一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，應(yīng)自行承擔(dān)。每株細(xì)胞2支凍存管復(fù)蘇時建議先只復(fù)蘇一支，若復(fù)蘇出現(xiàn)問題請及時與廠家取得聯(lián)系。

　　2.取出凍存管，浸入37溫水浴中，并不時搖動令其盡快融化，注意管口不要沒入水面以下，以免造成污染。

　　3.從37水浴中取出凍存管，用75%酒精擦拭凍存管表面，放入超凈臺內(nèi)。吸出細(xì)胞懸液，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶內(nèi)，補加6-8mL培養(yǎng)液，37溫箱靜置培養(yǎng)，隔天換新鮮培養(yǎng)液，以去除DMSO，或者復(fù)蘇當(dāng)時離心去除DMSO，并在顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)和密度；對于貼壁展開較慢的細(xì)胞，建議復(fù)蘇當(dāng)時去除DMSO，待細(xì)胞貼壁展開后再換液（原代細(xì)胞：細(xì)胞懸液離心后觀察管底沉淀初步判斷細(xì)胞量，后行臺盼藍(lán)染色以確定細(xì)胞存活率；接種后隔天觀察細(xì)胞貼壁量，以判定細(xì)胞貼壁率）。

　　4.貼壁細(xì)胞

　　過夜培養(yǎng)后多數(shù)細(xì)胞會重新貼壁，待匯合度80%左右時正常傳代。若細(xì)胞仍不能貼壁，請用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力。如臺盼藍(lán)染色證實細(xì)胞活力正常則1000rpm離心3-5min收集細(xì)胞，用新鮮培養(yǎng)基重懸后移回培養(yǎng)瓶內(nèi)重新貼壁培養(yǎng)。

　　5.懸浮細(xì)胞

　　過夜培養(yǎng)后多數(shù)細(xì)胞會逐漸恢復(fù)活力，有光澤、飽滿。若細(xì)胞光澤暗淡，用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力。

　　6.建議在收到細(xì)胞后每天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于菌種的查詢。

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