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腫瘤細胞現(xiàn)貨初代培養(yǎng)對培養(yǎng)基的要求

原載自:[行情動態(tài)]  2015-12-25  瀏覽次數(shù):1782

   腫瘤細胞現(xiàn)貨對培養(yǎng)基的要求不如正常細胞嚴格,一般常用的 RPMIl640、 DMEM、Mc-Coy等培養(yǎng)基等皆可用于腫瘤細胞培養(yǎng)。腫瘤細胞對血清的需求比正常細胞低,正常細胞培養(yǎng)不加血清不能生長,腫瘤細胞在低血清培養(yǎng)基中也能生長。腫瘤細胞現(xiàn)貨對培養(yǎng)環(huán)境適應(yīng)性較大,是因腫瘤細胞有自泌性產(chǎn)生促生長物質(zhì)之故。但這并不說明腫瘤細胞*不需要這些成分。按不同細胞需要不同的生長因子;腫瘤細胞現(xiàn)貨與正常細胞之間、腫瘤細胞之間對生長因子的需求都存在著差異。但大多數(shù)腫瘤細胞培養(yǎng)中仍需要生長因子。有的還需特異性生長因子〔如乳腺癌細胞等)。總之培養(yǎng)腫瘤細胞仍需加血清和相關(guān)生長因子培養(yǎng)更易成功。
  腫瘤細胞現(xiàn)貨與體內(nèi)正常細胞相比,不論在體內(nèi)或在體外,在形態(tài)、生長增值、遺傳性狀等方面都有顯著的不同。生長在體內(nèi)的腫瘤細胞和在體外培養(yǎng)的腫瘤細胞,其差異較小,但也并非*相同。培養(yǎng)中的腫瘤細胞現(xiàn)貨具以下突出特點:
 ?。ǎ┬螒B(tài)和性狀
  培養(yǎng)中癌細胞無光學顯微鏡下特異形態(tài),大多數(shù)腫瘤細胞鏡下觀察比二倍體細胞清晰,核膜、核仁輪廓明顯,核糖體顆粒豐富。電鏡觀察癌細胞表面的微絨毛多而細密,微絲走行不如正常細胞規(guī)則,可能與腫瘤細胞現(xiàn)貨具有不定向運動和錨著不依賴性有關(guān)。
 ?。ǘ┥L增殖
  腫瘤細胞現(xiàn)貨在體內(nèi)具有不受控增殖性,在體外培養(yǎng)中仍如此。正常二倍體細胞在體外培養(yǎng)中不加血清不能增殖,是因血清中含有很細胞增殖生長的因子,而癌細胞在低血清中(2%~5%)仍能生長。已證明腫瘤細胞現(xiàn)貨有自泌或內(nèi)泌性產(chǎn)生促增殖因子能力。正常細胞發(fā)生轉(zhuǎn)化后,出現(xiàn)能在低血清培養(yǎng)基中生長的現(xiàn)象,已成為檢測細胞惡變的一個指標。癌細胞或培養(yǎng)中發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化后的單個細胞培養(yǎng)時,形成集落(克?。┑哪芰Ρ日<毎麖?。另外癌細胞增殖數(shù)量增多擴展時,接觸抑制消除,細胞能相互重疊向三維空間發(fā)展,形成堆積物。
  (三)永生性
  永生性也稱不死性。在體外培養(yǎng)中表現(xiàn)為細胞可無限傳代而不凋亡(Apoptosis)。體外培養(yǎng)中的腫瘤細胞現(xiàn)貨系或細胞株都表現(xiàn)有這種性狀,體內(nèi)腫瘤細胞是否如此尚無直接證明。因惡性腫瘤終將殺死宿主并同歸于盡,從而難以證明這一性狀的存在。體外腫癌細胞的永生性是否能反證它在體內(nèi)時同樣如此?也尚難肯定。從近年建立細胞系或株的過程說明,如果永生性是體內(nèi)腫瘤細胞所固有的,腫瘤細胞應(yīng)易于培養(yǎng)。事實上,多數(shù)腫瘤細胞現(xiàn)貨初代培養(yǎng)時并不那么容易。生長增殖并不旺盛;經(jīng)過純化成單一化瘤細胞后,也大多增殖若干代后,便出現(xiàn)類似二倍體細胞培養(yǎng)中的停滯期。過此階段后才獲得永生性,順利傳代生長下去。從而說明體外腫瘤細胞的永生性有可能是體外培養(yǎng)后獲得的。從一些具有永生性而無惡性性的細胞系,如NIH3T3、Rat-1、10T1/2等細胞證明,永生性和惡性(包括浸潤性)是兩種性狀,受不同基因調(diào)控,但卻有相關(guān)性。可能永生性是細胞惡變的階段。至少在體外是如此。
  為提高腫瘤細胞現(xiàn)貨對體外培養(yǎng)環(huán)境的適應(yīng)力和增加有活力癌細胞(干細胞)的數(shù)量,可采用動物體轉(zhuǎn)嫁接種成瘤后,再從動物體內(nèi)取出進行培養(yǎng),能提高體外培養(yǎng)的成功率。
 

 

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