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ATCC細胞傳代時如何挽救污染的細胞?

原載自:m.niangtai.cn[行情動態(tài)]  2025-05-14  瀏覽次數(shù):194

  在細胞培養(yǎng)過程中,細胞污染是一個常見的問題,尤其是細菌、真菌和支原體污染。這些污染不僅會影響細胞的生長和實驗結(jié)果的準確性,還可能導致細胞死亡。ATCC細胞在傳代過程中,細胞污染仍然是一個需要特別關注的問題。
  一、識別污染的早期跡象
  在細胞傳代前,識別污染的早期跡象至關重要。常見的污染跡象包括:
  細菌污染:培養(yǎng)基變渾濁,細胞周圍出現(xiàn)小顆粒,培養(yǎng)基pH值變化(通常變酸)。
  真菌污染:培養(yǎng)基表面出現(xiàn)絲狀或絨毛狀物質(zhì),細胞形態(tài)異常。
  支原體污染:細胞生長緩慢,培養(yǎng)基無明顯變化,但細胞形態(tài)可能異常,如細胞聚集或變圓。
  二、挽救污染細胞的步驟
  1.確認污染類型
  在采取任何挽救措施之前,首先需要確認污染的類型??梢允褂蔑@微鏡觀察細胞形態(tài),或通過特定的檢測方法(如PCR、熒光染色等)來確定污染的具體類型。這一步驟對于選擇合適的挽救方法至關重要。
  2.選擇合適的抗生素或抗真菌劑
  根據(jù)污染類型,選擇合適的抗生素或抗真菌劑。例如:
  細菌污染:可以使用廣譜抗生素,如青霉素/鏈霉素或慶大霉素。
  真菌污染:可以使用抗真菌劑,如兩性霉素B或制霉菌素。
  支原體污染:可以使用支原體專用抗生素,如泰樂菌素或四環(huán)素。
  3.逐步處理污染
  更換培養(yǎng)基:首先將受污染的培養(yǎng)基全移除,用無菌的PBS(磷酸鹽緩沖液)輕輕沖洗細胞,去除表面的污染物。
  添加抗生素或抗真菌劑:將含有適當濃度抗生素或抗真菌劑的新鮮培養(yǎng)基加入培養(yǎng)瓶中,輕輕搖晃培養(yǎng)瓶,使細胞均勻分布。
  觀察細胞反應:將處理后的細胞放入培養(yǎng)箱中,定期觀察細胞的生長情況和污染的清除情況。通常需要連續(xù)處理3-5天,每天更換含有抗生素或抗真菌劑的培養(yǎng)基。
  4.評估處理效果
  在處理過程中,定期通過顯微鏡觀察細胞的形態(tài)和生長情況。如果污染得到控制,細胞形態(tài)恢復正常,可以逐漸減少抗生素或抗真菌劑的濃度,直至全去除。如果污染未能得到有效控制,可能需要考慮丟棄受污染的細胞,重新開始培養(yǎng)。
  三、預防污染的措施
  1.無菌操作
  在細胞傳代過程中,嚴格遵守無菌操作規(guī)程是預防污染的關鍵。所有操作應在超凈工作臺內(nèi)進行,使用無菌的培養(yǎng)基和試劑,避免交叉污染。
  2.定期更換培養(yǎng)基
  定期更換培養(yǎng)基可以減少細菌和真菌的滋生。根據(jù)細胞的生長情況,通常每2-3天更換一次培養(yǎng)基。
  3.定期檢測
  定期對細胞進行污染檢測,尤其是在傳代和凍存前后??墒褂蒙虡I(yè)化的支原體檢測試劑盒或PCR方法檢測支原體污染,使用顯微鏡觀察細菌和真菌污染。
  在ATCC細胞傳代時,挽救污染的細胞需要及時識別污染類型,并選擇合適的抗生素或抗真菌劑進行處理。通過逐步更換培養(yǎng)基和觀察細胞反應,可以有效控制污染,恢復細胞的正常生長。同時,嚴格遵守無菌操作規(guī)程和定期檢測是預防細胞污染的重要措施。在細胞培養(yǎng)過程中,及時發(fā)現(xiàn)和處理污染問題,可以很大程度地減少對實驗結(jié)果的影響,確保細胞培養(yǎng)的成功和實驗數(shù)據(jù)的可靠性。

 

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