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新聞動態(tài) / news
細(xì)胞株的不同轉(zhuǎn)染方式有何區(qū)別？
原載自：[行情動態(tài)] 2022-09-12 瀏覽次數(shù)：842
細(xì)胞株的轉(zhuǎn)染是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技能。隨著基因與蛋白功用研討的深化，轉(zhuǎn)染目前已成為試驗室工作中常常涉及的根本辦法。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑。電穿孔法、顯微打針和基因槍歸于通過物理辦法將基因?qū)爰?xì)胞的范例；化學(xué)介導(dǎo)辦法許多，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染辦法、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技能；生物介導(dǎo)辦法，有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染，和現(xiàn)在比較多見的各種病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技能。
細(xì)胞株轉(zhuǎn)染時的瞬轉(zhuǎn)和穩(wěn)轉(zhuǎn)區(qū)別是什么？
瞬轉(zhuǎn)即瞬時轉(zhuǎn)染，是指將外源質(zhì)粒通過某種方式導(dǎo)入到細(xì)胞內(nèi)得以表達(dá)；
穩(wěn)轉(zhuǎn)即病毒感染，是利用慢病毒將外源插入整合到宿主細(xì)胞的基因組，從而達(dá)到持久性表達(dá)。
由此可見，二者的區(qū)別即：
穩(wěn)轉(zhuǎn)是基因組整合到宿主細(xì)胞基因組，跟隨細(xì)胞一起增值得以穩(wěn)定遺傳；
瞬轉(zhuǎn)是質(zhì)粒游離在細(xì)胞內(nèi)，一個宿主細(xì)胞中可存在多個拷貝數(shù)，產(chǎn)生高水平的表達(dá)，但通常只持續(xù)幾天，但不能穩(wěn)定遺傳。
細(xì)胞株進(jìn)行轉(zhuǎn)染時轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備：
1.將400ul去核酸酶水參加管中，震動10秒鐘，溶解脂狀物。
2.震動后將試劑放在－20℃保存，使用前還需震動。
3.挑選適宜的混合比例（1：1－1：2/脂質(zhì)體體積：DNA質(zhì)量）來轉(zhuǎn)染細(xì)胞。在一個轉(zhuǎn)染管中參加適宜體積的無血清培育基。
4.將混合液在室溫放置10-15分鐘。
5.吸去培育板中的培育基，用PBS或者無血清培育基清洗一次。
6.加混合液，將細(xì)胞放回培育箱中培育一個小時。
7.到時后，依據(jù)細(xì)胞品種決議是否移除混合液，之后參加*培育基持續(xù)培育24-48小時。
