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ATCC細(xì)胞如何培養(yǎng)?

原載自:m.niangtai.cn[技術(shù)資料頻道]  2016-07-20  瀏覽次數(shù):2999

基本原理

 細(xì)胞培養(yǎng)(Cell culture)是模擬機體內(nèi)生理條件,將細(xì)胞從機體中取出,在人工條件下使其生存、生長、繁殖和傳代,進行細(xì)胞生命過程、細(xì)胞癌變、細(xì)胞工程等問題的研究。近年來,廣泛地應(yīng)用于分子生物學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、細(xì)胞工程等領(lǐng)域,發(fā)展成一種重要生物技術(shù),并取得顯著成就。由體內(nèi)直接取出組織或細(xì)胞進行培養(yǎng)叫原代培養(yǎng)。

 體外培養(yǎng)的原代細(xì)胞或細(xì)胞株要在體外持續(xù)地培養(yǎng)就必須傳代,以便獲得穩(wěn)定的細(xì)胞株或得到大量的同種細(xì)胞,并維持細(xì)胞種的延續(xù)。培養(yǎng)的細(xì)胞形成單層匯合以后,由于密度過大生存空間不足而引起營養(yǎng)枯竭,將培養(yǎng)的細(xì)胞分散,從容器中取出,以1:2或l:3以上的比率轉(zhuǎn)移到另外的容器中進行培養(yǎng),即為傳代培養(yǎng)。

試劑和設(shè)備

  細(xì)胞懸浮液; 

  6孔平底組織培養(yǎng)板,或φ60 mm培養(yǎng)皿; 

  18mm x 18mm 或20mm x 20mm浸于75%乙醇中的蓋玻片; 

  含血清培養(yǎng)基(通常為 RMPI 1640,含10% 小牛血清,100U/ml青霉素,100μg/ml鏈霉素); 

  超凈工作臺; 

  CO2孵箱; 

  蓋片鑷;

操作步驟

  1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布; 

  2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片); 

  3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時; 

  4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中; 

  5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

注意事項

  1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法; 

  2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理; 

  3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕; 

  4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率; 

  5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

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