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atcc細胞的細胞核分離原理說明

原載自:m.niangtai.cn[技術(shù)資料頻道]  2023-02-06  瀏覽次數(shù):1285

  細胞核作為atcc細胞的一個功能單位,完整地保存遺傳物質(zhì),并指導RNA合成,進而表達出相應的蛋白,在一定程度上細胞核控制著細胞的代謝、生長、分化和繁殖活動。因此細胞核的分離是研究基因表達及細胞核形態(tài)結(jié)構(gòu)的重要步驟。不同組織來源的細胞經(jīng)勻漿后,可用分級離心等方法將細胞核進行分離純化。
 
  細胞核的分離目前較常采用以蔗糖為介質(zhì)的差速離心法,可分為細胞核分離和純化兩大步驟。細胞勻漿后,先以0.25mol/L。的蔗糖1000g離心洗滌,然后在0.34mol/L和0.88mol/L的蔗糖梯度中1500g離心15-20分鐘,沉淀即為純化的細胞核。現(xiàn)在細胞核的提取試劑已商業(yè)化生產(chǎn),試劑盒說明書中會提供詳細的操作步驟。細胞核被分離后,可經(jīng)甲苯胺藍染色在光學顯微鏡下觀察,或直接在電子顯微鏡下觀察核內(nèi)染色質(zhì)的分布情況。
 
  此外,在細胞增殖的研究中,人們常常將Brdu/Edu等底物摻入到增殖的細胞核DNA鏈中,再通過熒光素標記Brdu/Edu,繼而顯色增殖細胞的細胞核。在細胞凋亡研究中,人們常采用TUNEL染色標記凋亡細胞的細胞核。
 
  由于三維重建等優(yōu)點,共聚焦顯微鏡在細胞成像技術(shù)中的地位逐漸突出。DAPI雖然常用,但是多數(shù)共聚焦顯微鏡沒有紫外線波段的激發(fā)光,所以其他一系列更適用于共聚焦的核酸熒光染料被開發(fā)出來,比如TOTO系列等等。

 

 

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