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剛收到的細胞株如何進行合理的處理?

原載自:m.niangtai.cn[技術(shù)資料頻道]  2022-11-09  瀏覽次數(shù):1329

   當(dāng)我們剛收到細胞株購買的包裹時,請檢查細胞株冷凍管是否有解凍情形,若有請立即告知供貨商。細胞株請盡速開始培養(yǎng),或立即冷凍保存(置于-70℃,隔夜后,移到liq N2)。
  冷凍細胞解凍程序如下:
  1.依據(jù)細胞株數(shù)據(jù)單規(guī)定之基礎(chǔ)培養(yǎng)基種類、血清種類和其它規(guī)定之成份和比例,制備培養(yǎng)基。絕大多數(shù)之細胞均無法立即適應(yīng)不同之基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同之血清種類,若因?qū)嶒炐枰仨氂兴煌瑫r,務(wù)必以緩慢比例漸次改變培養(yǎng)基組成,確定細胞適應(yīng)后,方進行所需之實驗。
  2.FBS(胚牛血清),CS(小牛血清)和HS(馬血清)對細胞而言差異極大,請務(wù)必依據(jù)細胞株資料單規(guī)定之血清種類培養(yǎng)之。
  3.將培養(yǎng)基置于37℃水槽中回溫,回溫后噴以70%酒精并擦拭之,移入無菌操作臺內(nèi)。取出冷凍管,立即放入37℃水槽中快速解凍,水面高度不可接近或高過冷凍管之蓋沿,否則易發(fā)生污染。輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化后,以70%ethanol擦拭冷凍管外部,移入無菌操作臺內(nèi)。
  4.依據(jù)細胞種類和濃度,于無菌操作臺內(nèi)取10 ml培養(yǎng)基加至T25或T75 flask中。取出已解凍之細胞懸浮液,緩緩加入T25或T75 flask內(nèi)之培養(yǎng)基,混合均勻,放入37℃,5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
  5.對絕大多數(shù)細胞而言,1%以下之冷凍保護劑DMSO,不會對細胞之貼附或活化有不良影響,不需立刻由解凍細胞中去除,待第二天確定細胞生長或貼附良好后再去除即可。惟對極少數(shù)因?qū)MSO敏感或會造成細胞分化之細胞,需立即去除DMSO者,則可將解凍后之細胞懸浮液放入5-10 ml培養(yǎng)基中,離心300 xg(約1000 rpm),5分鐘,小心移去上清液,加入適量新鮮培養(yǎng)基,將細胞均勻混合后,轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中,再放入37℃,5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

 

 

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