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技術(shù)文章 / article
細(xì)胞株的核型分析實驗操作流程分析
原載自：m.niangtai.cn[技術(shù)資料頻道] 2021-10-12 瀏覽次數(shù)：1645
細(xì)胞株是用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法，由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。然而細(xì)胞株在體外培養(yǎng)的過程中會出現(xiàn)一些問題，如細(xì)胞株無法在培養(yǎng)皿上貼壁生長，細(xì)胞株生長緩慢，細(xì)胞株死亡等。
細(xì)胞株的核型分析實驗操作研究：
進行該實驗的所需材料有：姬姆色素染料；秋水仙素；甲醇；冰乙酸；KCL；0.25%胰酶。
實驗儀器包括顯微鏡、二氧化碳培養(yǎng)箱、水浴鍋、烘箱等。
具體實驗步驟如下：
將傳代的細(xì)胞密度調(diào)整為1*105/ml，接種于1個10cm培養(yǎng)皿，置于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，約培養(yǎng)48小時后，加秋水仙素（終濃度為0.2ug/ml），搖勻后37℃孵育1-2h。
將培養(yǎng)的細(xì)胞用胰酶消化收集到10ml離心管中，1000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，去除上清液，留500ul,先將底部細(xì)胞吹勻，加入8ml 37℃預(yù)溫的0.075M KCL(37℃提前水浴)，打勻后放37℃水浴箱40min，加入新鮮配制的固定液（甲醇/冰乙酸=2/1-3/1）2ml地混勻，室溫下放10min后，1000轉(zhuǎn)/分離心10min，去上清液，留500ul,先將底部細(xì)胞吹勻，新加入8ml固定液，離心清洗、重復(fù)三次后、滴片，放入60℃烘箱老化6小時（過夜）；再將烤干的玻片放入胰酶（0.25%）中消化1min左右后，再放入吉姆薩染液中染色5-6min，取出用流水沖去染液后，在顯微鏡下觀察結(jié)果。
相關(guān)實驗注意事項：
1.滴片的載玻片需預(yù)先泡酸處理；
2.低滲溶液要用無菌水配制；
3.低滲溶液，胰酶需要提前預(yù)熱；
4.固定液、胰酶、吉姆薩染色液需現(xiàn)配現(xiàn)用。
