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細胞株的核型分析實驗操作流程分析

原載自:m.niangtai.cn[技術資料頻道]  2021-10-12  瀏覽次數(shù):1608

   細胞株是用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法,由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質(zhì)或標志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。然而細胞株在體外培養(yǎng)的過程中會出現(xiàn)一些問題,如細胞株無法在培養(yǎng)皿上貼壁生長,細胞株生長緩慢,細胞株死亡等。
  細胞株的核型分析實驗操作研究:
  進行該實驗的所需材料有:姬姆色素染料;秋水仙素;甲醇;冰乙酸;KCL;0.25%胰酶。
  實驗儀器包括顯微鏡、二氧化碳培養(yǎng)箱、水浴鍋、烘箱等。
  具體實驗步驟如下:
  將傳代的細胞密度調(diào)整為1*105/ml,接種于1個10cm培養(yǎng)皿,置于37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),約培養(yǎng)48小時后,加秋水仙素(終濃度為0.2ug/ml),搖勻后37℃孵育1-2h。
  將培養(yǎng)的細胞用胰酶消化收集到10ml離心管中,1000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘,去除上清液,留500ul,先將底部細胞吹勻,加入8ml 37℃預溫的0.075M KCL(37℃提前水浴),打勻后放37℃水浴箱40min,加入新鮮配制的固定液(甲醇/冰乙酸=2/1-3/1)2ml地混勻,室溫下放10min后,1000轉(zhuǎn)/分離心10min,去上清液,留500ul,先將底部細胞吹勻,新加入8ml固定液,離心清洗、重復三次后、滴片,放入60℃烘箱老化6小時(過夜);再將烤干的玻片放入胰酶(0.25%)中消化1min左右后,再放入吉姆薩染液中染色5-6min,取出用流水沖去染液后,在顯微鏡下觀察結(jié)果。
  相關實驗注意事項:
  1.滴片的載玻片需預先泡酸處理;
  2.低滲溶液要用無菌水配制;
  3.低滲溶液,胰酶需要提前預熱;
  4.固定液、胰酶、吉姆薩染色液需現(xiàn)配現(xiàn)用。

 

 

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