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人結(jié)腸癌細胞株試驗要點及說明

原載自:m.niangtai.cn[技術(shù)資料頻道]  2018-09-26  瀏覽次數(shù):1679

  人結(jié)腸癌細胞株的復(fù)蘇,遵守慢凍快融的原則。先將水浴鍋調(diào)至37-37.5度,取出凍存的細胞迅速放入后將細胞面浸至水面以下不斷搖動至融化。在無菌臺內(nèi)將*培養(yǎng)基加入50ml的小培養(yǎng)瓶內(nèi),約5ml左右,然后用無菌吸管從凍存管內(nèi)取出細胞,置培養(yǎng)并內(nèi)輕輕搖晃,使細胞均勻后置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。
  人結(jié)腸癌細胞株的原位染色:
  (1)貼壁生長的對數(shù)期細胞鋪在24孔或6孔板中(內(nèi)有潔凈蓋玻片),讓其爬片生長,待長到50%~80%滿時,凋亡誘導(dǎo)劑處理細胞。
  (2)將不同時間點處理的細胞進行免疫熒光染色,染色步驟同上。
  (3)將染色的爬片細胞放于一張滴有少量甘油(5ml)的載玻片上,熒光顯微鏡或共聚焦激光掃描顯微鏡觀察TFAR19在細胞中的定位。
  人結(jié)腸癌細胞株試驗要點及說明:
  1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
  2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
  3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
  4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
  5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
  人結(jié)腸癌細胞株是一種成團、貼壁生長的細胞,如果狀態(tài)好的情況下,生長非???,細胞形態(tài)是不太規(guī)則的三角形.在低濃度時,此細胞長梭型(不好描述),高濃度時長成一張地毯,后者才是狀態(tài)好的。

 

 

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