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一個好的ATCC細(xì)胞株有多方面要求

原載自:m.niangtai.cn[技術(shù)資料頻道]  2018-05-26  瀏覽次數(shù):3078

  一個好的ATCC細(xì)胞株有多方面要求:
  1. 產(chǎn)量高,高的產(chǎn)量直接降低固定投資和單次生產(chǎn)成本。
  2. 產(chǎn)品質(zhì)量符合要求。產(chǎn)品質(zhì)量影響藥效和安全性。
  3. 穩(wěn)定性。產(chǎn)量和質(zhì)量在生產(chǎn)傳代過程中不應(yīng)有大的改變。一般認(rèn)為在60-90PDL產(chǎn)量變化不超過30%是可以接受的。
  4. 與生產(chǎn)過程的相容性。細(xì)胞株需要適合大規(guī)模生產(chǎn)放大。
  5. 合規(guī)。ATCC細(xì)胞株的構(gòu)建過程應(yīng)避免接觸或使用動物來源成分或其它可能影響安全性的成分, 保證單克隆性(clonality)以及整個過程的實(shí)驗(yàn)記錄完整。
  ATCC細(xì)胞株無菌操作注意事項(xiàng)
  1.操作前要洗手,進(jìn)入超凈臺后手要用75%酒精或0.2%新潔爾滅擦試。試劑等瓶口也要擦試。
  2.點(diǎn)燃酒精燈,操作在火焰附近進(jìn)行,耐熱物品要經(jīng)常在火焰上燒灼,金屬器械燒灼時間不能太長,以免退火,并冷卻后才能夾取組織,吸取過營養(yǎng)液的用具不能再燒灼,以免燒焦形成碳膜。
  3.操作動作要準(zhǔn)確敏捷,但又不能太快,以防空氣流動,增加污染機(jī)會。
  4.不能用手觸已消毒器皿的工作部分,工作臺面上用品要布局合理。
  5.瓶子開口后要盡量保持45℃斜位。
  6.吸溶液的吸管等不能混用。
  ATCC細(xì)胞株的細(xì)胞處理:
  1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)隔夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)隔夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
  2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
  對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
  方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
  方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
  3)ATCC細(xì)胞株的細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。懸浮細(xì)胞凍存時,應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM條件下離心5分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。

 

 

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