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ATCC細(xì)胞冷凍保存方法

原載自:m.niangtai.cn[技術(shù)資料頻道]  2018-02-24  瀏覽次數(shù):2747

   ATCC細(xì)胞通常保存在凍存管中用干冰運(yùn)輸,或是在培養(yǎng)瓶中常溫運(yùn)輸。但對(duì)于中國(guó)客戶,由于運(yùn)輸時(shí)間稍長(zhǎng),都是采用干冰運(yùn)輸?shù)姆绞健?div>  在收到凍存細(xì)胞后,很重要的一點(diǎn)是迅速解凍使其立即復(fù)蘇并除去DMSO,然后將它們放置到培養(yǎng)基中。如果做不到上面這點(diǎn),需將細(xì)胞存儲(chǔ)在液氮中(-130℃以下)。不要將凍存細(xì)胞儲(chǔ)存在高于-130℃的溫度下,這會(huì)使細(xì)胞存活率迅速下降。
  ATCC細(xì)胞注意事項(xiàng):
 ?。?)欲冷凍保存之細(xì)胞應(yīng)在生長(zhǎng)良好(logphase)且存活率高之狀態(tài),約為80–90%致密度。
  (2)冷凍前檢測(cè)細(xì)胞是否仍保有其*性質(zhì),例如hybridoma應(yīng)在冷凍保存前一至二日測(cè)試是否有抗體之產(chǎn)生。
  (3)注意冷凍保護(hù)劑之品質(zhì)。DMSO應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí),無(wú)菌且無(wú)色(以0.22micron FGLP flon過(guò)濾或是直接購(gòu)買無(wú)菌產(chǎn)品,如Sigma D-2650),以5~10ml小體積分裝,4℃避光保存,勿作多次解凍。Glycerol亦應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí),以高壓蒸汽滅菌后避光保存。在開(kāi)啟后一年內(nèi)使用,因長(zhǎng)期儲(chǔ)存后對(duì)細(xì)胞會(huì)有毒性。
  ATCC細(xì)胞冷凍保存方法:
 ?。?)傳統(tǒng)方法:冷存管置于4℃10分鐘→ -20℃30分鐘→ -80℃16~18小時(shí)(或隔夜)→液氮槽vaporphase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。-20℃不可超過(guò)1小時(shí),以防止冰晶過(guò)大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
  (2)程序降溫:利用已設(shè)定程序的等速降溫機(jī)以-1~-3℃/分鐘之速度由室溫降至(-80℃以下)-120℃,再放在液氮槽vaporphase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。適用于懸浮型細(xì)胞與hybridoma之保存。

 

 

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