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人結(jié)腸癌細(xì)胞株的細(xì)胞形態(tài)是不太規(guī)則的三角形

原載自:m.niangtai.cn[技術(shù)資料頻道]  2016-12-05  瀏覽次數(shù):2037

   人結(jié)腸癌細(xì)胞株是一種成團(tuán)、貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞,如果狀態(tài)好的情況下,生長(zhǎng)非???,細(xì)胞形態(tài)是不太規(guī)則的三角形.在低濃度時(shí),此細(xì)胞長(zhǎng)梭型(不好描述),高濃度時(shí)長(zhǎng)成一張地毯,后者才是狀態(tài)的。.
  收到人結(jié)腸癌細(xì)胞株atcc后,取出培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。
  (一)如果細(xì)胞未長(zhǎng)滿,用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi),嚴(yán)格無(wú)菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,吸出培養(yǎng)液,僅留下10ml培養(yǎng)液在瓶?jī)?nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。
  (二)如果細(xì)胞已長(zhǎng)滿,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下:
  1. 棄去培養(yǎng)液,用PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次。
  2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱,然后又將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30秒后,在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓分散,輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶,細(xì)胞隨即脫落下來(lái)。
  3. 加入6-8ml*培養(yǎng)基,吸出,分到新的培養(yǎng)瓶中。一傳二。
  因時(shí)間及溫度的變化,很多貼壁細(xì)胞在盛滿培養(yǎng)基的瓶子里生長(zhǎng)的狀態(tài)和平時(shí)會(huì)有點(diǎn)不一樣,主要是貼壁牢固問(wèn)題(如:比如293T,平時(shí)貼壁就不是很牢,在裝滿的培養(yǎng)基瓶子里面,會(huì)發(fā)生大片的脫落)。人結(jié)腸癌細(xì)胞株在低于正常生長(zhǎng)溫度情況下,會(huì)調(diào)整為靜止期,或者慢速生長(zhǎng)期,必須恢復(fù)37度的環(huán)境至少3個(gè)小時(shí)左右,才能重新調(diào)整到接近對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的狀態(tài)。

 

 

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